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疏水性層析蛋白純化系統進行蛋白純化分三步
發布時間:2018-05-28   點擊次數:1250次
疏水性層析蛋白純化系統進行蛋白純化有三步:
  捕獲——從細胞其它成份,比如DNA和RNA中分離需要的蛋白;
  區分——從與目的蛋白具有相近的大小,或者相似的物理/化學特征的污染物中分離蛋白;
  修飾——使分離得到的樣品處于可使用狀態。
 
疏水性層析蛋白純化系統捕獲步驟,也就是從細胞裂解物粗成份中分離蛋白,這需要一個具有高容量和高流量的填料。bead大小比較大,范圍比較寬的“fast flow”填料比較理想,這種填料也有利于防止目標蛋白被水解——因為速度比較快。
 
疏水性層析蛋白純化系統區分對分辨率要求更高,需要更好的從混合物中分離需要的成份。通常bead的大小與分辨率成反比,因此在這一部中比較小的bead比較合適。吸附性的技術,比如離子交換IEX和疏水作用HI通常被用在純化的這前兩個步驟,而凝膠過濾則會留到了zui后的修飾那一步,用于小體積,高濃度的樣品。另外要注意,進行凝膠過濾層析時,樣品的體積應該保持在柱床體積的1%到4%。
 
選擇柱料的時候有兩個因素要考慮到,針對目的蛋白的選擇性和有效性——這些可以由洗脫峰的寬度來說明。其中選擇性主要是指填料與目的蛋白相互作用以及結合的能力,IEX和HI層析方法就是指目標分子與篩分介質之間的相互作用,而GF的選擇性依賴于填料的分餾范圍。

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