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凝膠層析蛋白純化系統的操作規程詳細說明
發布時間:2021-04-26   點擊次數:567次
   凝膠層析蛋白純化系統是一種根據分子大小從混合物中分離蛋白質的方法。不同蛋白的形狀及分子大小存在差異,在混合物通過含有填充顆粒的凝膠過濾層析柱時,由于各種蛋白的分子大小不同,擴散進入特定大小孔徑顆粒內的能力也各異,大的蛋白分子會被先洗脫出來,分子越小,越晚洗脫,從而達到分離蛋白的目的。一般來說,凝膠過濾層析柱越細、越長純化的效果越好。
 
  凝膠層析蛋白純化系統的操作規程:
  1、使用前,根據自己所要分離蛋白的性質確定所需的分離柱及緩沖液,打開計算機及儀器,但不要急于打開軟件,等計算機與儀器連接再打開軟件,此過程大約需要3-5分鐘。
 
  2、將純水先抽濾脫氣,然后選擇流路連到機器上,先洗泵,然后給機器一個流速和壓力。選擇的較高壓力須小于柱子所能承受的壓力極限。
 
  3、將柱子連接到儀器上,接柱子時,須等進液管中的液體出來,將柱子的一頭與進液管通過接頭連接,先不要擰的太緊,等液體從柱子的另一頭流出,再用接頭將其與出液管相連擰緊,再將進液管端擰緊,這樣防止柱子中進入氣泡,影響分離效果。
 
  4、柱子接上后,換上配好的緩沖液用緩沖液平衡至儀器的各條基線都平后,再上樣。
 
  5、上樣時,必須通過濾膜過濾,具體上樣體積視樣品濃度而定,采用不同的上樣環上樣。
 
  6、儀器使用完畢,切記要用純水清洗泵和柱子,洗柱直至各條基線都平為止,防止鹽和粒子結晶于泵和柱子使機器報廢。若長期不用,再用20%的乙醇清洗系統和柱子,防止泵和柱子生長微生物。

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