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親和層析蛋白純化系統層析方法步驟
發布時間:2015-11-04   點擊次數:2272次
親和層析蛋白純化系統使用前才添加成10 mM β-mercaptoethanol.
Buffer B-300/20: Buffer B-300/0 加有20 mM imidazole
Buffer B-300/250: Buffer B-300/0 加有250 mM imidazole
 
親和層析蛋白純化系統方法步驟:
1、親和層析膠體1mL已經裝填在管柱內,成為一淡藍色膠柱。請把管柱架直在鐵架上,去除下方的填塞物,用bufferB-300/0流洗20mL后塞住出口,準備注入樣本。  
2、除去膠面上方的緩沖液,并取出樣本(IEX)使其回到室溫,慢慢用滴管加到親和膠體上,小心勿弄亂膠體表面;讓樣本沒入膠體中,同時收集流出液每管2.5mL。
3、待樣本全部進入膠體后,關閉出口,再慢慢加入bufferB-300/20,打開出口收集流出液;bufferB-300/20共流洗30mL。
4、接著以bufferB-300/250流洗30mL,方法同上,收集。
5、所有收集均定量蛋白質并測定酶活性,取收集酶活性zui高的數個,共得多少mL(AF),保留100μL以供分析。

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