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蛋白純化系統分泌型和融合型表達
發布時間:2018-01-12   點擊次數:968次
蛋白純化系統分泌型表達
外源基因表達產物在細胞質中過度積累會影響細胞的生理功能,并且后續的分離純化較為困難,以分泌型蛋白的形式來表達外源基因產物則可以解決上述問題。分泌型蛋白是指外源基因的表達產物通過運輸或分泌的方式穿過細胞的外膜進入培養基中。
以分泌型蛋白的形式表達外源基因簡化了發酵后處理的純化工藝;減少了外源蛋白在細胞內被蛋白酶降解的概率;通過對分泌表達的設計有利于形成正確的空間構象,獲得有較好生物學活性或免疫原性的蛋白質。
 
蛋白純化系統融合型表達
將外源蛋白基因與受體菌自身蛋白基因重組在一起,但不改變兩個基因閱讀框,這樣形成的蛋白質稱為融合蛋白。含原核細胞多肽的融合蛋白是避免細菌蛋白酶破壞的措施。在某些情況下,融合蛋白還具有較高的水溶性和一定的生物學活性。
表達融合型蛋白時,為了得到正確的真核蛋白,在插入真核基因時,應非常注意其閱讀框架,其閱讀框架應與融合的I)NA片段的閱讀框架一致,只有這樣,在翻譯時才不至于產生移碼突變。
外源蛋白以融合蛋白的方式表達時易于分離純化,可根據受體菌蛋白的結構和功能特點,利用受體菌蛋白的特異性抗體、配體或底物親和層析等技術分離純化融合蛋白,然后通過蛋白酶水解或化學法特異性裂解受體菌蛋白與外源蛋白之間的肽鍵,獲得純化的外源蛋白產物。

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