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分子篩層析蛋白純化系統的應用范圍和操作步驟
發布時間:2020-03-11   點擊次數:2877次
   分子篩層析蛋白純化系統具有分子篩作用的物質很多,如浮石、瓊脂、瓊脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠等。以葡聚糖凝膠應用較廣,從G10到G200,它的主要應用范圍是:
 ?、俜旨壏蛛x各種抗原與抗體;
 ?、谌サ魪秃衔镏械男》肿游镔|。如除鹽、熒光素和游離的放射性同位素以及水解的蛋白質碎片;
 ?、鄯治鲅逯械拿庖邚秃衔?;
 ?、芊肿恿康臏y定。
 
  分子篩層析蛋白純化系統的操作步驟:
  1.打開電腦,進入AKTA系統。
  2.打開AKTA電源,連接系統。
  3進入UniCorn系統。
  4.用水洗A泵。
  5.設置層析柱的壓力上限及適當的流速。
  6.將Superdex200TM層析柱或Superdex75TM層析柱與FPLC連接。
  7.用至少1個柱體積的水沖洗層析柱。
  8.用至少1個柱體積的緩沖溶液平衡層析柱。
  9.將準備好的樣品于4℃,12000rpm離心10-20min。
  10.在Load狀態下通過上樣環上樣。
  11.在Inject狀態下樣品進入系統,并在2mL時調回Load狀態。
  緩沖液(流動相)和樣品流過柱子,分子進入不同的材料孔中。小一些的分子移動的距離更。

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