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凝膠層析蛋白純化系統的樣品是怎樣制備的
發布時間:2020-05-24   點擊次數:1031次
   凝膠層析蛋白純化系統采用高度靈活配置的模塊化設計,具有許多優點來進行快速、靈活、穩定的純化。?KTA?pure硬件的所有閥門、檢測器和層析柱均面向操作者安裝,方便科研人員清楚、直觀地了解各個模塊之間的關系和樣品以及緩沖液的流路。?KTA?pure將樣品環上樣改進為直接上樣,入口可實現系統和層析柱的自動清洗??蒲腥藛T從一個純化任務轉向另一個純化任務僅僅需要幾分鐘,在保持準確性和確保重復性的同時,大大地節省制備時間。
 
  凝膠層析蛋白純化系統的樣品制備:
  1.樣品必須澄清,沒有顆粒狀物,否則容易堵塞層析柱。
 
  2.樣品緩沖液:樣品緩沖液的pH、離子強度和組成不會顯著性影響結果的分辨率,只要這些參數不影響被分離蛋白質的大小和穩定性,也不超出填料的穩定范圍。
 
  3.樣品濃度:凝膠過濾分離效果與樣品量無關,因此與樣品濃度也沒有關系。通常蛋白濃度不要超過60mg/mL。樣品的溶解性和粘度會限制樣品濃度,關鍵在于樣品相對于流動相的粘度,太高的樣品粘度會引起分離的不穩定性和不規則的流動形式,會導致非常寬和成串的峰形,反壓也會增加,因此對于粘度大的樣品需要進行稀釋。
 
  樣品體積:在凝膠過濾中,這是重要的參數之一。一般推薦上樣的體積在1-30%之間,可以做梯度實驗,確定較佳的上樣體積。

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