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疏水性層析蛋白純化系統純化工藝的建立和遵循的基本原則
發布時間:2022-03-23   點擊次數:73次
   疏水性層析蛋白純化系統是一種根據分子大小從混合物中分離蛋白質的方法。不同蛋白的形狀及分子大小存在差異,在混合物通過含有填充顆粒的層析柱時,由于各種蛋白的分子大小不同,擴散進入特定大小孔徑顆粒內的能力也各異,大的蛋白分子會被先洗脫出來,分子越小,越晚洗脫,從而達到分離蛋白的目的。一般來說,層析柱越細、越長純化的效果越好。能純化的蛋白分子量范圍很寬,純化過程中也不需要能引起蛋白變性的有機溶劑。
 
  疏水性層析蛋白純化系統建立蛋白質純化工藝時,重要的是需要考慮純化得到的蛋白質應能滿足其后續應用要求。蛋白質的數量及純度都必須滿足實驗分析要求。而且,因為后續研究需要的是保持良好折疊結構的活性蛋白質,因此蛋白質行為的相關信息也需要考慮。
 
  在純化及后續的保存過程中,很多處理方法都會對蛋白質的性質產生影響,如蛋白質的去折疊、聚集、降解和失活等。
 
  制定詳細計劃,在較短時間內完成蛋白質純化,并在穩定的條件下進行保存才算是成功地完成了其整個純化過程。
 
  疏水性層析蛋白純化系統遵循的基本原則:
  1.待純化無料樣品的來源,目的蛋白的理化性質要充分了解熟悉(基本包括分子量、PI、主要雜蛋白來源等);
 
  2.純化工藝設計時要明確純化所要達到的期望目標目標;
 
  3.依據所要達到的期望目標,對純度,回收率,活性、實驗成本等因素合理取舍,設計科學合理的純化工藝;
 
  4.熟悉蛋白純化過程的各種常用添加劑的性能和作用,合理的添加使用,可以是純化工藝事半功倍。

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