分子篩層析蛋白純化系統作為分析蛋白質顆粒聚集物的一種有力工具,被用于研究重組乙肝表面抗原聚集物的形成。已去除聚集物的表面抗原放置在不同的理化條件下或經過不同的純化方法處理后,應用HPLC分析其聚集物的形成。為研究發酵過程中是否形成表面抗原聚集物,酵母細胞破碎后立即用Sepharose 4 FF層析柱分離為不同的組分,并分別進行HPLC分析。結果發現,在純化過程和酵母發酵階段都有表面抗原聚集物的產生。

 

分子篩層析蛋白純化系統的特點

1)大多數蛋白質產品是生物活性物質,在分離純化過程中,有機溶劑、溶液pH值、離子強 度的變化均可使蛋白質變性失活。

2)蛋白質產品在物料中含量很低,且物料組成非常復雜。例如,利用基因工程菌發酵生產蛋白質,物料中含有大量組成復雜的培養基、菌體生產代謝物等,目標蛋白質的含量常常不到蛋白質總量的1%。有些目標蛋白質存在于細胞內或在胞內形成包含體,為獲取蛋白質,還需進行細胞破碎,結果物料中含有大量的細胞碎片和胞內產物。

3)含蛋白質產品的物料不穩定,蛋白質產品易受料液中蛋白水解酶降解。

4)很多蛋白質產品作為醫藥、食品被人類利用,因而要求蛋白質產品必須是高度純化的,產品無菌、無致熱源等。