離子交換蛋白純化系統的基本操作  

1、DEAE-纖維素的預處理：  

稱取2gDE-52，置于砂芯漏斗中，先在20mL0.5mol/LNaOH中浸泡30min，然后用蒸餾水淋洗至pH=8.0，再用20mL0.5mol/LHCl浸泡30min，然后用蒸餾水淋洗至pH=4.0。zui后用20mL0.5mol/LNaOH浸泡30min后蒸餾水洗至pH=8.0。用洗脫液A浸泡已處理好的DEAE—纖維素，并更換1～2次。

2、裝柱取1.5ⅹ20cm層析柱一根，如圖1裝柱。裝入約10mL洗脫液A，打開下活塞讓緩沖液慢慢滴出，同時，將懸浮于適量洗脫液A中的DEAE—纖維素一邊攪動一邊倒入層析柱中，讓其自然沉降到全部加入為止。用洗脫液A以1.0ml/min的流速平衡柱子，直到流出液pH與起始緩沖液的完全相同為止。

注：裝柱時交換劑一次倒入，若分次倒入時，則須在再次添加之前將界面處的交換劑攪起，以保證柱床不分節。柱面要平整，柱中無氣泡。

3、上樣

上述平衡過程完畢后，待液面離纖維素沉降面約1cm后，關閉活塞。用滴管將樣品沿管壁小心加入，待全部樣品進入柱后，在柱床面上加一層洗脫液A。上樣量占柱體積的2.5%左右。

4、洗脫

連接洗脫瓶，打開柱下口開始洗脫。先用洗脫液A洗脫1個柱體積（收集在一個試管中），流速約0.5ml/min；然后用洗脫液B中5個梯度分別洗脫一個柱體積，分別收集，流速約0.5ml/min。

5、鑒定收集各個洗脫組分，紫外吸收法測定每個組分的蛋白含量。