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離子交換蛋白純化系統純化工藝常用銜接技術
發布時間:2017-12-13   點擊次數:956次
離子交換蛋白純化系統是選擇合適孔徑的超濾膜,在離心力或較高壓力下,使水分子和其他小分子物質通過超濾膜,而目標蛋白樣品分子被截留不能通過超濾膜,從而增加蛋白樣品濃度,達到濃縮效果。

離子交換蛋白純化系統純化工藝常用銜接技術:
1、鹽析。常采用硫酸銨、硫酸鈉鹽析,獲得的鹽析沉淀物在低溫冰箱中可以長期保存。
2、等電點沉淀。根據蛋白質、多肽在等電點時溶解度zui小的特點進行。
3、有機溶劑沉淀。采用冷的丙酮、乙醇沉淀蛋白質。例如人血漿蛋白的乙醇分級沉淀。
4、透析。根據目的蛋白質、多肽的分子量,選取適宜的透析袋進行透析,可以起到更換緩沖液以及去除一些低分子雜質的目的。
5、超濾。根據目的蛋白質、多肽的分子量,選取適宜截留分子量(MWcutoff)的超濾膜進行超濾。
6、真空冷凍干燥。利用在低溫和高真空條件下,冰不經融化為液態水而直接升華為水蒸氣的原理??梢院芎玫貪饪s樣品和保存蛋白質、多肽的生物活性。
7、變性沉淀。根據目的蛋白質、多肽對于溫度或者酸堿性的耐受性,在較高的溫度或者較的pH條件下處理樣品,使雜質去除的方法。例如胸腺肽制備中使用的熱變性去除雜蛋白。如果目的蛋白、多肽本身熱穩定性、酸堿穩定性不高則不宜采用。
8、離心沉淀。利用離心沉降力將不溶性顆粒物與溶液分離的技術,常采用高速冷凍離心機進行。
9、脫鹽。透析、超濾可用于進行脫鹽,Sephadex G25、G50常用于蛋白質脫鹽。
10、過濾
澄清過濾、除菌過濾、超濾。

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