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DWD-1紫外檢測儀

  • 產品型號:
  • 更新時間:2022-05-19

DWD-1紫外檢測儀蛋白質分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸。它們具有吸收紫外光的性質,其吸收高峰在280nm波長處,且在此波長內吸收峰的光密度值與其濃度成正比關系,故可作為蛋白質定性、定量測定的依據,正因為如此,280nm處的紫外吸收法通常被用于層析系統中蛋白質濃度的連續監控。但由于各種蛋白質的酪氨酸和色氨酸的含量不同,故要準確定量,必需要有待測蛋白質的純品作為標準來比較,或且已經

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蛋白質280nm/254nm雙波長測定:

蛋白質分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸。它們具有吸收紫外光的性質,其吸收高峰在280nm波長處,且在此波長內吸收峰的光密度值與其濃度成正比關系,故可作為蛋白質定性、定量測定的依據,正因為如此,280nm處的紫外吸收法通常被用于層析系統中蛋白質濃度的連續監控。但由于各種蛋白質的酪氨酸和色氨酸的含量不同,故要準確定量,必需要有待測蛋白質的純品作為標準來比較,或且已經知道其消光系數作為參考。另外,不少非蛋白物質在280nm波長下也有-定吸收能力,可能發生干擾。其中尤以核酸(嘌呤和嘧啶堿)的影響更為嚴重。在280nm處的吸收比蛋白質強10倍(每克),但核酸在254nm處的吸收更強,其吸收高峰在254nm附近。核酸254nm處的消光系數是280nm處的2倍,

而蛋白質則相反,280nm紫外吸收值大于254nm的吸收值。

通常

純蛋白質的光吸收比值:A280/A254》1.8

純核酸的光吸收比值:A280/A254《0.5

因此蛋白質溶液中同時存在核酸時(生物體系大多數如此),必須同時測定OD254nm,與OD280nm。然后根據兩種波長的吸收度的比值,通過經驗公式校正,以消除核酸的影響而推算出蛋白質的真實含量。

蛋白質濃度=1.45×A280-0.74×A254(mg/ml)

此經驗公式是通過一系列已知不同濃度比例的蛋白質(酵母烯醇化酶)和核酸(酵母核酸)的混合液所測定的數據來建立的。

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